細菌性結膜炎可通過臨床癥狀觀察、實驗室檢查、裂隙燈檢查、染色試驗、病原體培養等方式診斷。該疾病通常由金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等病原體感染引起。
患者常表現為眼瞼紅腫、結膜充血、黃色分泌物增多等癥狀。晨起時可能出現睫毛粘連，嚴重者伴隨畏光或異物感。癥狀持續超過24小時且單眼先發時需高度懷疑細菌性感染。
結膜刮片檢查可發現中性粒細胞增多，革蘭染色能快速鑒別細菌類型。聚合酶鏈反應檢測對不典型病例有較高敏感性，能識別淋球菌等特殊病原體。
通過生物顯微鏡觀察結膜濾泡形態，細菌性結膜炎多表現為彌漫性乳頭增生。角膜熒光素染色可排除并發性角膜炎，該檢查對隱形眼鏡佩戴者尤為重要。
結膜囊分泌物進行吉姆薩染色可顯示細胞內細菌，鑒別衣原體等非細菌性病原體。阿爾新藍染色有助于評估黏液分泌狀態，輔助判斷感染嚴重程度。
血瓊脂培養基培養48小時可明確致病菌種，對反復發作或治療無效的病例具有確診價值。藥敏試驗能指導臨床選擇左氧氟沙星、妥布霉素等敏感抗生素。
確診后應避免揉眼并每日熱敷眼部，使用獨立毛巾防止交叉感染。飲食中增加維生素A和Omega-3脂肪酸攝入，如胡蘿卜、深海魚等有助于黏膜修復。急性期暫停游泳等水上運動，外出佩戴防紫外線眼鏡減少刺激。若出現視力下降或劇烈疼痛需立即復診排除角膜并發癥。
