擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性AFLP是一種基于PCR技術(shù)的DNA指紋圖譜分析方法，通過(guò)限制性內(nèi)切酶消化和選擇性擴(kuò)增檢測(cè)基因組DNA多態(tài)性。該方法結(jié)合了RFLP的可靠性與PCR的高效性，適用于遺傳多樣性研究、品種鑒定和分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)。

1、技術(shù)原理：AFLP通過(guò)兩種限制性內(nèi)切酶如EcoRI和MseI對(duì)基因組DNA進(jìn)行雙酶切，產(chǎn)生粘性末端片段。連接特定接頭后，使用含選擇性堿基的引物進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增和選擇性擴(kuò)增，最終通過(guò)電泳分離顯示多態(tài)性條帶。酶切片段大小差異反映個(gè)體間遺傳變異。

2、操作流程：實(shí)驗(yàn)步驟包括DNA提取、雙酶切消化、接頭連接、預(yù)擴(kuò)增、選擇性擴(kuò)增和凝膠電泳分析。選擇性引物通常在3'端添加1-3個(gè)選擇性核苷酸，可調(diào)節(jié)擴(kuò)增片段數(shù)量，典型引物組合如EcoRI+ACG/MseI+CAT。

3、應(yīng)用領(lǐng)域：廣泛應(yīng)用于植物遺傳圖譜構(gòu)建如水稻、小麥、微生物分型如沙門氏菌、動(dòng)物親緣關(guān)系分析如家畜品種鑒定。在作物育種中可檢測(cè)與抗病性、產(chǎn)量相關(guān)的QTL位點(diǎn)。

4、技術(shù)優(yōu)勢(shì)：無(wú)需預(yù)先知道基因組序列，一次反應(yīng)可檢測(cè)50-100個(gè)位點(diǎn)，多態(tài)性檢出率高于RAPD和SSR標(biāo)記。重復(fù)性好，分辨率可達(dá)1個(gè)堿基差異，適合大規(guī)模群體遺傳分析。

5、局限性：實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求高，需精密控制PCR條件。顯性標(biāo)記特性難以區(qū)分純合/雜合基因型，且成本高于SSR標(biāo)記。放射性同位素銀染檢測(cè)存在安全隱患，近年逐漸被熒光標(biāo)記替代。

日常實(shí)驗(yàn)中需注意DNA質(zhì)量、酶切完全性和擴(kuò)增條件優(yōu)化。建議使用瓊脂糖凝膠預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選合適引物組合，聚丙烯酰胺凝膠電泳可提高分辨率。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備精密溫控設(shè)備，操作過(guò)程需戴手套防污染。