三氯叔丁醇具有消毒防腐、局部麻醉、止癢鎮痛等作用，其應用方式包括皮膚消毒、醫療器械滅菌、口腔黏膜麻醉、創傷鎮痛、化妝品防腐。

三氯叔丁醇能有效殺滅細菌和真菌，常用于皮膚消毒和醫療器械滅菌。其分子結構中的氯原子可破壞微生物細胞膜，適用于手術前皮膚準備、注射部位消毒。0.5%-1%濃度溶液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等常見致病菌有顯著抑制作用。

該成分通過阻斷神經末梢鈉離子通道產生麻醉效果，適用于口腔科黏膜表面麻醉或小范圍皮膚麻醉。相比普魯卡因等傳統麻醉劑，其刺激性更小且作用迅速，但持續時間較短約30-60分鐘。

三氯叔丁醇可抑制組胺釋放并降低神經敏感性，用于蟲咬皮炎、濕疹等瘙癢性皮膚病。含1%-3%濃度的乳膏能緩解輕度燒傷、曬傷引起的疼痛，其冷卻效應可收縮局部血管減輕炎癥反應。

作為復合制劑成分時，能促進小面積擦傷、割傷的愈合。與苯扎氯銨聯用可增強抗菌效果，與利多卡因配伍能實現麻醉與消毒雙重功能，常見于創可貼、外傷噴霧等產品。

在化妝品和藥品中作為防腐劑使用，濃度通常控制在0.3%以下。通過抑制微生物生長延長產品保質期，尤其適用于眼藥水、滴鼻劑等多劑量包裝制劑，比苯甲酸類防腐劑更少引起過敏反應。

日常使用含三氯叔丁醇的產品需注意濃度控制，皮膚消毒建議選擇0.5%溶液，創面處理優先選用復合制劑。過敏體質者使用前應做斑貼試驗，避免接觸眼瞼等黏膜部位。該成分與氯己定聯用可增強殺菌效果，但與碘制劑存在配伍禁忌。長期頻繁使用可能引起皮膚干燥，建議配合凡士林等保濕劑。醫療器械滅菌需采用1%濃度浸泡10分鐘以上，口腔麻醉使用后30分鐘內避免進食。